CONTINUAÇÃO... Resíduos de Acetamiprid e Thiamethoxam em Tomate Estaquedo (Lycopersicon esculentum Mill.)

09/08/2012 14:20

Descrição do método de análise de resíduos de acetamiprid em folhas de tomateiro

O método de analise de resíduos foi em tudo semelhante ao método anteriormente descrito para frutos: Reagentes; Aparelhos/ Equipamentos; Vidrarias e outros materiais; Marcha Analítica.

 

Descrição do método de análise de resíduos de thiamethoxam em frutos de tomateiro (Novartis, 1998).

Princípio do método

O método analítico consiste na extração dos resíduos totais de thiamethoxam e se metabólito CGA 322704, com mistura de metanol + água; a limpeza do extrato é inicialmente feita em partição liquído-liquído entre o extrato aquoso e diclorometano; segue-se coluna cromatográfica de sílica-gel, sendo a eluição procedida com acetonitrila; finalmente; a limpeza do extrato é concluída por meio de cromatografia de permeação em gel (GPC), utilizando como fase móvel mistura de acetona/ciclohexano (2/1). A determinação quantitativa é feita por técnica de cromatografia líquida HPLC, usando-se cromatógrafo equipado com detector de UV visível.

Procedimento Analítico

-Aparelhos/ Equipamentos

  • Cromatógrafo líquido, Gilson equipado com detector UV visível;
  • Software Gilson UniPoint;
  • Injetor/ Coletor de frações, Gilson, modelo 215;
  • Coluna LiChrospher 100 RP-18, diâmetro 3 mm x 125 mm e 5µm de tamanho de partícula;
  • Coluna Plgel, 300 mm de comprimento, diâmetro de 7,5 mm, 5µm de partícula e 100Å de poro;
  • Coluna Plgel, 300 mm de comprimento, diâmetro de 7,5 mm, 5µm de partícula e 50Å de poro;
  • Moinho elétrico, Sire cutter;
  • Evaporador/ Concentrador, Zymark, Turbo Vap-LV;
  • Mesa agitadora, Marconi;
  • Centrífuga, Revan, Ciclo CI;
  • Bomba de vácuo, Primar, modelo 141;
  • Purificador de água Milli-Q, Millipore, modelo Academic;
  • Balança analítica, mettler, modelo H10;
  • Balança analítica,sartorius, modelo Basic;
  • Pipetador de graduação regulável, Pipetman, Gilson P 10 ml;

 

Solventes/ Reagentes

  • Acetona, p.a., Mallinckrodt, destilada em destilador de vidro;
  • Diclometano, nanograde, Mallinckrodt;
  • Metanol, AR, Mallinckrodt;
  • Metanol, HPLC, Mallinckrodt;
  • Acetonitrila, HPLC, Mallinckrodt;
  • Ciclohexno, AR, Mallinckrodt;
  • Água Milli-Q;
  • Sílica-gel, Merck, 230-400 mesh;
  • Na2SO4, anidro, granulado, QM;
  • Sílica-gel, dessecante azul;
  • Celite 545;
  • Padrão analítico de thiamethoxam;
  • Padrão analítico de CGA 32274 (metabólico).

 

Vidrarias e outros materiais

  • Tubos Schott, 100 ml, tampa rosqueável;
  • Balões volumétricos, 100 ml, Corning- Pirex 5642;
  • Kitassatos, 500 ml, Corning- Pirex 5340;
  • Funis de Buchner, 90 mm Ф, Chiaroti 03-90;
  • Provetas graduadas, 25, 50, 100 e 250 ml;
  • Pipetas graduadas, 1, 5 e 10 ml;
  • Pipeta volumétrica, 25 ml;
  • Beakers, 150 ml Corning- Pirex 1000;
  • Vidros âmbar, 15 ml com tampa rosqueável;
  • Tubos de centrifuga, 15 ml, Corning- Pirex 8080;
  • Tubos de centrifuga, 50 ml, Corning 430829;
  • Seringas hipodérmicas, polietileno, BD, 5 ml e 10 ml;
  • Membrana filtrante, HV, Millex, 0,45 ì m poro x 13 mm de diâmetro;
  • Papéis de filtro, analítico;
  • Peras de borracha;
  • Espátulas.

 

Macha Analítica

Preparo das Soluções

Foram preparadas, inicialmente, soluções estoque de thiamethoxam em metanol. Para tanto, os padrões analíticos são pesados em balança analítica de precisão, e o material solubilizado no metanol, de modo a fornecer concentração exata de 0,2 mg/ml. As soluções padrão, para injeção no sistema cromatográfico HPLC, são preparadas a partir das soluções estoque com as diluições feitas em água deionizada.

Fortificações

-Nível 0,02 mg/kg (ppm)

Inicialmente foram preparadas soluções de thiamethoxam na concentração de 0,2 µg/ml, obtidas a partir das soluções estoques, descritas anteriormente, com diluições feitas em metanol. Adciona-se 1 ml de cada solução, assim obtida, em subamostras de 10g cada uma de substrato (tomate), obtido de frutos sabidamente nunca anteriormente contaminados.

-Nível 0,2 mg/kg (ppm)

Foram preparadas, inicialmente, soluções de thiamethoxam na concentração de 2 µg/ml,, obtidas a partir das soluções estoque, descritas anteriormente, com diluições feitas em metanol. Adicionou-se 1 ml de cada solução estoque, descrita anteriormente contaminados.

Extração

  1. Foi pesado 10g da amostra homogeneizada, colocada em tubo Schott, onde adicionou-se 50 ml de uma mistura de metanol + água (1/1, v/v) e foi agitado em mesa agitadora durante uma hora a 140 ciclos/minuto.
  2. O extrato foi filtrado, através do funil de Buchner, forrado ao fundo com papel de filtro recoberto por uma camada de Celite 545, para um kitassato com o auxilio de vácuo. Os conteúdos do tubo Scott e os do funil foram lavados com mais 30 ml da mistura.
  3. O extrato foi transferido para balão volumetrico de 100 ml e completado o volume até a marca com a mistura dos solventes de extração.
  4. Foi retirada uma olíquota de 20 ml ( correspondente a 2 g do material) e foi transferida para um tubo de polietileno de 50 ml.

Limpeza

  1. Adicionou-se 2 ml de diclorometano e agitou-se vigorosamente durante um minuto, e foi centrifugado por três minutos para melhor separação das fases.
  2.  A fase orgânica inferior foi recolhida, com o auxílio de pipeta volumétrica de 25 ml, em outro tubo de 50 ml.
  3. O extrato foi evaporado até secura no evaporador Turbo Vap- LV a 40° C com auxílio de ar movente, fornecido por compressor, previamente seco em filtro de sílica-gel dessecante azul.
  4. Foi preparada coluna cromatográfica de sílica-gel, adicionando-se 2g do adsorvente a uma seringa hipodérmica de polietileno de 10 ml e 0,5 g  de Na2SO4 ao topo da coluna; esta foi condicionada com 5 ml de uma solução ciclohexano/acetato de etila (1/1, v/v).
  5. Os resíduos proveniente de III. Foram dissolvidos com 3 x 2 ml da solução de ciclohexano/acetato de etila (1/1, v/v) e introduzido na coluna. Foi eluido com 20 ml da solução ciclohexano/acetato de etila (1/1, v/v), e descartado e eluado.
  6. Foi passado 5 ml de acetato de etila pela coluna, e descartado o eluado.
  7. Finalmente, os resíduos de Thiamethoxam foram eluídos da coluna de sílica-gel com 13 ml de acetonitrila, e coletado o eluado em tubo de centrífuga de 15 ml.
  8. O extrato foi evaporado até secura no Turbo Vap- LV a 40° C, com auxílio de ar movente, fornecido por compressor, previamente seco em filtro de sílica-gel dessecante azul.
  9. Os resíduos provenientes de VIII. Foram dissolvidos em 1 ml de uma solução acetona/ciclohexano (2/1, v/v) e transferidos para vidros apropriados com tampa rosqueável e septo teflon, e feita a limpeza técnica de cromatografia de permeação em gel (GPC), usando-se como fase móvel a mesma mistura de solventes (acetona/ciclohexano), com fluxo de 1 ml/min., desprezando-se os eluados os 11,5 min. Iniciais e colentando a fração em eluição nos 1,5 minutos subsequentes.
  10. Foi evaporado até secura no Turbo Vap- LV a 40° C, com auxilio de ar movente, previamente seco em filtro de sílica-gel dessecante azul.

 

Determinação Quantitativa

  1. Os resíduos proveniente de X. foram dissolvidos em volume exato de 2 ml com água destilada e deionizada. O extrato foi ressuspendido em seringa hipodérmica, BD, 5 ml.
  2. Foi filtrado através de menbrana filtrante Millex para vials próprios para uso no cromatógrafo.
  3. Condições de operação do cromatógrafo:

Eluentes:   A: água

                  B: metanol

                  Gradiente: 73%A/72%B, zero minuto;

                                    73%A/27%B, 3 minutos 30 segundos;

                                    55%A/45%B, 8 minutos 30 segundos;

                                    10%A/90%B, 10 minutos 30 segundos;

                                    10%A/90%B, 11 minutos 30 segundos;

                                    73%A/27%B, 13 minutos 30 segundos;

                                    73%A/27%B,  18 minutos 30 segundos;

                 Fluxo: 0,5 ml/ min.

                 Volume injetado: 20,0 µL

                 Comprimento de onda: 40°C

                 Ranger: 1 Mau

                Tempo de retenção: 5 minutos 40 segundos

Ánalise de Dados

Foi utilizado o programa SANEST -  Sistema de Ánalise Estatística- para o cálculo das tabelas de mortalidade de insetos.

 

 

 

 

 

Fonte:

Pissini, Milena Martins de Oliveira

Resíduos de Acetamiprid e Thiamethoxam em tomate estaquedo

(Lycopersicon esculentum Mill.), em diferentes modalidades de

Aplicação / Milena Martins de Oliveira Pissini. – Piracicaba, 2003.

71 p.

Dissertação (mestrado) - - Escola Superior de Agricultura Luiz de

Queiroz, 2003.

Bibliografia.

  1. Controle químico 2. Estacas (plantas) 3. Impactos ambientais 4.

Inseticidas (aplicações) 5. Resíduos de pesticidas em plantas I.

Titulo

CDD 635.642

 

 

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